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抗呼吸道合胞病毒(RSV)药物筛选药效评估
      呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus, RSV)属副粘病毒科,肺病毒属,是引起秋冬季婴幼儿下呼吸道感染的重要病毒性病原体,广泛分布于世界各地。其发病率高,可引起严重的支气管炎和肺炎,而且半数以上的儿童两岁前都感染过 RSV,老年人和免疫力低下的人群中也会暴发流行。世界卫生组织(WHO)已将研制开发 RSV 疫苗列为全球疫苗计划的优先发展项目之一,但目前仍无安全有效的疫苗获准上市。临床多以广谱抗病毒药雾化吸入治疗,缺乏特异有效的治疗方法。抗 RSV 药物活性筛选应用Vero细胞和 Balb/c 鼠作为筛选模型,检测体外药物对感染细胞的保护作用(CPE 观察及 MTT 法检测)、血清 RSV 抗体、肺组织病毒滴度、肺组织病理学检查等指标评价抗 RS V新药。

体外抗呼吸道合胞病毒药效检测 

材料与方法

  1. 体外细胞模型:Vero 细胞。
  2. 病毒株:呼吸道合胞病毒(RSV)标准毒株。
  3. MTT 法检测药物对细胞的毒性。
  4. CPE(细胞病变)、MTT 法检测药物对呼吸道合胞病毒的抑制作用。
  5. 阳性药物对照:病毒唑。
试验过程
  1. 药物的细胞毒性检测Vero 细胞在 96 孔细胞培养板中培养形成单层后,加入不同浓度的药液,继续培养3天,用 MTT 法检测药物对 Vero 细胞的毒性。
  2. 药物抗呼吸道合胞病毒病毒作用检测Vero 细胞在 96 孔细胞培养板中培养形成单层后,用 100TCID50 的呼吸道合胞病毒病毒感染细胞,再加入无毒浓度下的系列浓度的含药培养液,继续培养 3 天,经 CPE 法确定药物对呼吸道合胞病毒的抑制作用。
体内抗呼吸道合胞病毒药效检测

材料与方法

  1. 动物模型: Balb/c 鼠。
  2. 病毒株: 呼吸道合胞病毒标准毒株。
  3. 阳性药物对照: 病毒唑。
试验过程
  1. 呼吸道合胞病毒对小鼠半数致死量(LD50)的测定昆明种小鼠,雌雄各半,雌雄分笼饲养。分别滴鼻感染不同稀释度的病毒液,每天观察,至感染后第 14 天为止。以死亡和生存为指标,计算病毒的半数致死量(LD50)。
  2. 药物抗呼吸道合胞病毒病毒感染试验Balb/c,雌雄各半,雌雄分笼饲养。经滴鼻感染 50μl10×LD50 的呼吸道合胞病毒后,给予药物,共给药 8 天。第 8 天剖杀小鼠,取血分离血清,用 ELISA 法测定抗 RSV 抗体,观察肺部病变,测定肺组织悬液在 Vero 细胞中的病毒滴度(TCID50),计算抑制率 % 和半数有效量。