•  发现新药，服务于新药，国内领先的抗病毒药物筛选及药效评估技术支持平台！ 
首页 / 服务指南 / 服务内容
loading..加载中请稍候...
抗乙肝病毒（HBV）药物筛选药效评估
      乙型肝炎病毒（Hepatitis B Virus，HBV）属嗜肝 DNA 病毒科，其基因是一环形的部分双链的 DNA 分子，是目前所发现的最小具有复制功能的 DNA 病毒。全球携带表面抗原阳性的即 HBsAg 的人数超过 3 亿，中国是乙型肝炎的高感染流行区，曾经感染过乙肝的人数为 5-6 亿，而10% 的人口即 1.2 亿为慢性表面抗原携带者，我国目前患有慢性乙肝的病人超过 3000 万，其中部分病人将发展为肝硬化或肝癌。目前临床治疗慢性乙肝多应用干扰素、拉米呋啶（贺普定）和新上市的抗病毒药恩替卡韦（博路定）。但由于 HBVcccDNA 不能彻底地被清除，病毒变异及病人的免疫耐受等原因，造成抗病毒治疗仅对一小部分患者有效，且复发率高。抗 HBV 药物的活性筛选选用 HepG2 2.2.15 细胞及 DHBV 阳性鸭血清感染北京芙蓉鸭两种模型，检测体外药物对病毒抗原表达的抑制作用、药物对鸭血清 DHBV DNA 的抑制作用。

体外抗 HBV 药效检测

材料与方法
  1. 体外细胞模型: 乙型肝炎病毒（HBV）转染的 HepG2 细胞, 即 HepG2 2.2.15 细胞。
  2. MTT法检测样品对细胞的毒性。
  3. 酶联免疫法 (EIA) 检测样品对 HBsAg 和 HBeAg 的抑制作用。
  4. 阳性药物对照: 拉米夫定（3TC）。
  5. RT- PCR 检测 HBV-RNA/DNA
试验过程
  1. 药物的细胞毒性检测HepG2 2.2.15 细胞在 96 孔细胞培养板中培养 48 小时后，加入不同浓度含药培养液，继续培养 9 天，用MTT法检测细胞存活率，确定药物对HepG2 2.2.15 细胞的毒性浓度。
  2. 药物对 HBV 病毒抗原抑制作用检测HepG2 2.2.15 细胞在 24 孔细胞培养板中培养 48 小时后，加入无毒浓度下的系列浓度的含药培养液，继续培养，在培养第9天收集上清液，用 HBsAg 和 HBeAg 诊断试剂盒)检测 HBsAg 和 HBeAg。用 RT- PCR 检测 HBV-RNA/DNA 复制数。

体内抗鸭乙肝病毒（DHBV）药效检测

材料与方法
  1. 动物模型:北京芙蓉鸭。
  2. 病毒: DHBV 阳性鸭血清。
  3. 阳性药物对照: 拉米夫定（3TC）或自选对照药物。
  4. 地高辛高引物 DNA 标记与检测试剂盒。
试验过程

       一日龄鸭北京芙蓉鸭挑选阴性鸭经胫静脉感染 DHBV 阳性鸭血清，再筛选出 DHBsAg 阳性芙蓉鸭，给予药物，共给药 10 天，于第 5、10 天及停药后 3 天采血，用 southernblot 检测鸭血清 DHBV-DNA 水平。根据病理切片观察肝脏病变情况。计算DHBV-DNA抑制%和肝病变抑制%，评估测试药物的抗病毒及减轻肝损的效果。