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抗单纯疱疹病药物筛选
      疱疹类病毒（herpes viruses，HSV）属 DNA 病毒，为有膜病毒，人类共有 8 种，分为α、β和γ三个亚科。α亚科包括人分单纯疱疹病毒 1 型和 2 型（herpes viruses type1、type2,HSV-1、HSV-2），HSV-1 引起唇疱疹，HSV-2 引起生殖器感染。单纯疱疹病毒感染在人群中广泛存在，初次原发感染绝大多数形成隐性感染，无临床症状，感染后产生中和抗体，60-90% 的人群中抗体检测为阳性，但不能清除病毒。药物治疗仍然是目前治疗的主要手段，阿昔洛韦、泛昔洛韦是目前应用最多最有效的治疗药物，是第二代广谱抗病毒口服药物。抗 HSV-1、HSV-2 药物的体外活性筛选选用 Vero 细胞模型，检测药物对病毒感染细胞的保护作用（CPE 观察及 MTT 法检测）。动物模型豚鼠、昆明鼠和家兔等，观察药物对 HSV-Ⅰ和HSV-Ⅱ病毒感染小鼠引发的脑炎、引起的豚鼠皮肤损伤和引起的家兔角膜炎的保护作用以及对 HSV-Ⅱ 经阴道感染小鼠引起的阴道炎的保护作用等指标。

体外抗疱疹病毒作用检测

材料与方法
  1. 体外细胞模型： Vero 细胞
  2. 病毒株：单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ), 单纯疱疹病毒 Ⅱ 型(HSV-Ⅱ)。
  3. MTT 法检测药物对细胞的毒性。
  4. CPE法(细胞病变)检测药物对疱疹病毒的抑制作用。
  5. 阳性药物对照: 阿昔洛韦(ACV)。
抗病毒试验过程
  1. 药物的细胞毒性检测Vero 细胞在 96 孔细胞培养板中培养形成单层后，加入不同浓度的药液，继续培养 3 天，用MTT法检测药物对 Vero 细胞的毒性。
  2. 药物抗疱疹病毒作用检测Vero 细胞在 96 孔细胞培养板中培养形成单层后，用 10TCID50的HSV-Ⅰ 或 HSV-Ⅱ 感染细胞，再加入无毒浓度下的系列浓度的含药培养液，继续培养 3 天，经 CPE 法确定药物对疱疹病毒的抑制作用。
体内抗疱疹病毒药效检测

抗 HSV - Ⅰ 药效检测

材料与方法
  1. 动物模型: 雄性豚鼠。
  2. 病毒株: HSV -Ⅰ。
  3. 阳性药物对照: 阿昔洛韦。
抗病毒试验过程

      用 HSV-I 病毒原液感染雄性豚鼠背部皮肤。病毒感染后 2 小时给予药物，共给药 5 天，每天观察记录皮肤病损情况，共 8 天。以皮肤病损的减轻程度确定药物对 HSV -Ⅰ 感染豚鼠的保护作用。

抗 HSV - Ⅱ 药效检测

材料与方法
  1. 动物模型: 雌性昆明小鼠。
  2. 病毒株: HSV -Ⅱ。
  3. 阳性药物对照: 阿昔洛韦。
抗病毒试验过程
  1. HSV -Ⅱ病毒对小鼠半数致死量(LD50)的测定昆明种小鼠，雌性，经阴道感染不同稀释浓度的 HSV -Ⅱ 病毒液，每天观察，至感染后第 14 天为止。以死亡和生存为指标,计算病毒的半数致死量(LD50)。
  2. 药物对 HSV -Ⅱ 感染小鼠的死亡保护试验
  3. 昆明种小鼠，雌性，经阴道感染 10×LD50 的 HSV -Ⅱ 病毒后，给予药物，共给药 6 天。各组小鼠均自感染之日起观察 2 周，观察小鼠发病症状，记录死亡时间，死亡数，计算死亡率 %，死亡保护率 %、平均生存时间和生命延长率 %。