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抗柯萨奇B3病毒（CVB3）药物筛选药效评估
      抗柯萨奇B病毒（Coxsackie B virus,CVB）属于小 RNA 病毒科的肠病毒属，有 6 个血清型，即 CVB1-6，其中 3 型引起的儿童心肌炎较多。感染 CVB3 可引起的心肌急性或慢性炎症，临床以急性心功能衰竭、心律失常、慢性心肌病为主要表现，甚至猝死，严重危害青少年健康。许多研究证明，有两种机制参与了 CVB 病毒性心肌炎（viral myocarditis ,VMC）的发生：一是病毒直接侵犯心肌发生病变，即病毒的直接溶细胞作用；二是T淋巴细胞介导的免疫损伤作用，从而造成心肌损伤。临床上对 VMC 的治疗策略虽明确，但目前仍无特效疗法，仍多采用综合及对症支持疗法。现有抗病毒药和免疫调节药物无一种治疗能影响本病的进展和病程。抗 CVB3 药物的活性筛选选用 Vero 细胞、心肌原代细胞及 CVB3 腹腔感染 Balb/c 鼠多种模型，检测体外药物对感染细胞的保护作用（CPE 观察及 MTT 法检测）、药物对病毒感染鼠的死亡保护作用、血清病毒含量、心肌组织悬液的病毒中和抗体、心肌组织病理、心肌酶及诱生干扰素等指标。

体外抗柯萨奇B3病毒药效检测

材料与方法
  1. 体外细胞模型：Vero 细胞，大鼠乳鼠心肌原代细胞。
  2. 病毒株：抗柯萨奇B3病毒（CVB3）Nancy 毒株。
  3. MTT 法检测药物对细胞的毒性。
  4. CPE 法(细胞病变)检测药物对柯萨奇 B3 病毒的抑制作用。
  5. 阳性药物对照：盐酸胍。
试验过程

  1. 药物的细胞毒性检测Vero 细胞在 96 孔细胞培养板中培养形成单层后，加入不同浓度的药液，继续培养 3 天，用MTT法检测药物对 Vero 细胞的毒性。
  2. 药物抗柯萨奇 B3 病毒作用检测Vero 细胞在 96 孔细胞培养板中培养形成单层后，用 100TCID50 的柯萨奇 B3 病毒感染细胞，再加入无毒浓度下的系列浓度的含药培养液，继续培养 3 天，经 CPE、MTT 法确定药物对柯萨奇 B3 病毒的抑制作用。培养原代心肌细胞，同时感染病毒，不同时间加药，培养3天需换药液，检测CPE的同时，还补充检测心肌细胞搏动次数及变化 %、上清液中心肌酶活力。

体内抗柯萨奇B3病毒药效检测

材料与方法

  1. 动物模型: Balb/c 鼠。
  2. 病毒株: 抗柯萨奇 B3 病毒（CVB3）Nancy 毒株。
  3. 阳性药物对照:空缺。

试验过程

  1. 抗柯萨奇 B3 病毒（CVB3）对小鼠半数致死量（LD50）的测定Balb/c 小鼠,雄性，腹腔感染不同稀释度的病毒液，每天观察，至感染后第 14 天为止。以死亡和生存为指标,计算病毒的半数致死量（LD50）。
  2. 药物抗柯萨奇B3病毒试验Balb/c,雄性，10-100LD50 病毒 0.1ml 经腹腔感染小鼠，感染后开始 3-4 个剂量给药，观察 14 天记录各组的生存状态及行为变化，统计死亡数、死亡保护率、平均生存天数；Vero 细胞上滴定不同时间采集的血清中病毒浓度计算 TCID50；心肌组织悬液的病毒中和抗体滴定；心肌组织形态学观察；检测血清乳酸脱氢酶变化等指标。